Пеш аз ҳама, пеш аз интихоби парма, ба душвориҳо дар пӯлоди зангногир назар андозедфланеци пулодйкоркард. Бифаҳмед, ки душворӣ метавонад хеле дақиқ ва зуд пайдо кардани истифодаи парма бошад. Дар коркарди фланец аз пӯлоди зангногир чӣ мушкилот вуҷуд дорад? Корди часпанда: сахтии чипи коркарди аз пӯлоди зангногир, ҳарорати буридан хеле баланд аст. Вақте ки чипи қавӣ тавассути сатҳи буриши пеши ҷараён мегирад, он илтиёмӣ, кафшери меёфт ва дигар падидаи илтиёмӣ ба амал меояд, ки ба равшании намуди қисмҳои коркардшуда таъсир мерасонад; Сахтшавии кор сахт аст.

Дар истеъмолифланецҳои калон, бисёр унсурҳои функсионалӣ вуҷуд доранд, ки таъсир мерасонандфланецҳои калон. Дар ин ҷо мо дар бораи якчанд унсурҳои умумӣ гап мезанем. Якум ин ҳарорати гармкунӣ аст (ҳарорати гармкунӣ мутаносибан параметри ҳарорати праймер ва қолаб мебошад, вақте ки 50% пайдарпаии праймер ва комплементарӣ ҳарорати молекулаҳои дуқабати ДНК мебошанд.

Ин омили муҳимест, ки ба хусусияти PCR таъсир мерасонад. Дар ҳолати аспиратсия, ҳарорати гармкунӣ ба қадри кофӣ паст аст, то праймер бо пайдарпаии мақсаднок тасдиқ карда шавад ва барои коҳиш додани ҷудошавии ғайримуқаррарӣ кофӣ баланд аст. Ҳарорати оқилонаи гармкунӣ аз 55 ℃ то 70 ℃ аст. Ҳарорати тозакунӣ одатан дар 5℃ пасттар аз Tm аз праймер муқаррар карда мешавад.