முதலில், துரப்பணியைத் தேர்ந்தெடுப்பதற்கு முன், துருப்பிடிக்காததைப் பாருங்கள்எஃகு விளிம்புசெயலாக்குவது கடினம் என்றால் என்ன? துரப்பணம் பிட்டின் பயன்பாட்டைக் கண்டறிய, சிரமம் மிகவும் துல்லியமானது, மிக வேகமாக இருக்கும் என்பதைக் கண்டறியவும். இதில் என்ன சிரமங்கள் உள்ளனதுருப்பிடிக்காத எஃகு விளிம்புசெயலாக்க? சுருக்கமான குச்சி கத்தி: துருப்பிடிக்காத எஃகு செயலாக்க சிப் வலுவான மற்றும் கடினமான, வெட்டு வெப்பநிலை மிகவும் அதிகமாக உள்ளது. முன் கத்தி மேற்பரப்பு வழியாக வலுவான சிப் ஓட்டம் போது, ​​பிணைப்பு, இணைவு வெல்டிங் மற்றும் பிற ஒட்டும் நிகழ்வு தாக்கும், செயலாக்க பாகங்கள் மேற்பரப்பு பிரகாசம் பாதிக்கும்; வேலை கடினப்படுத்துதல் கடுமையானது.

நுகர்வில்பெரிய விளிம்புகள், இன் செயல்பாட்டை பாதிக்கும் பல காரணிகள் உள்ளனபெரிய விளிம்புகள், பின்வருபவை நாம் சில பொதுவான காரணிகளை சொல்கிறோம், முதலாவது அனீலிங் வெப்பநிலை (அனீலிங் வெப்பநிலை முறையே ப்ரைமர் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டின் வெப்பநிலை அளவுரு ஆகும், ப்ரைமர் மற்றும் நிரப்பு வரிசையின் 50 சதவீதம் இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளின் வெப்பநிலை ஆகும்.
இது PCR இன் தனித்துவத்தை பாதிக்கும் மிக முக்கியமான காரணியாகும். லட்சியத்தைப் பொறுத்தவரை, அனீலிங் வெப்பநிலையானது இலக்கு வரிசையுடன் தணிக்க ப்ரைமர் பயனுள்ளதாக இருப்பதை உறுதிசெய்யும் அளவுக்கு குறைவாக உள்ளது, மேலும் முறையே குறிப்பிடப்படாததைக் குறைக்கும் அளவுக்கு அதிகமாக உள்ளது. 55 முதல் 70 வரையிலான நியாயமான அனீலிங் வெப்பநிலை பொதுவாக ப்ரைமரின் Tm ஐ விட 5 குறைவாக அமைக்கப்படுகிறது.