ကြီးမားသောအနားကွပ်များထုတ်လုပ်မှုတွင်၊ ကြီးမားသောအနားကွပ်များ၏စွမ်းဆောင်ရည်ကိုထိခိုက်စေသောအချက်များစွာရှိသည်။ အောက်တွင်ကျွန်ုပ်တို့ပြောလေ့ရှိသောအချက်များစွာမှာ၊ ပထမအချက်မှာ annealing temperature ( annealing temperature သည် primer နှင့် template ကိုပေါင်းစပ်သောအခါ အပူချိန် parameter ဖြစ်ပြီး၊ primer ၏ 50% သည် complementary sequence ကို double-အဖြစ်ဖော်ပြသည့်အပူချိန်ဖြစ်သည်။ သောင်တင်နေသော DNA မော်လီကျူးသည် PCR ၏ သီးခြားသတ်မှတ်မှုကို ထိခိုက်စေသည့် အရေးကြီးသောအချက်တစ်ခုဖြစ်ပြီး စံပြအခြေအနေအောက်တွင်၊ primer များကို ထိထိရောက်ရောက် ချေမှုန်းရန် သေချာစေရန် လုံလောက်သော အပူချိန်နိမ့်သည်။ Non-specific binding ကိုလျှော့ချရန် လုံလုံလောက်လောက်မြင့်မားနေချိန်တွင် ကျိုးကြောင်းဆီလျော်စွာ annealing temperature သည် 55°C မှ 70°C အထိဖြစ်သည်။ annealing temperature သည် primer ၏ Tm ထက် 5°C နိမ့်သည်။

သတ်မှတ်ထားသော အပူချိန်သို့ ရောက်သလား။ Annealing temperature သည် လိုအပ်သော အပူချိန်သို့ ရောက်ရှိသည်။ ကြီးမားသောအနားကွပ်ကုသမှုကို အများအားဖြင့် "annealing" ဟုခေါ်သော အစိုင်အခဲပျော်ရည်အပူကုသမှုဖြင့် ဆောင်ရွက်ကြပြီး အပူချိန်အကွာအဝေးမှာ 1040~1120°C (ဂျပန်စံနှုန်း) ဖြစ်သည်။ annealing furnace ၏ စူးစမ်းလေ့လာရေးအပေါက်မှတဆင့်လည်း ကြည့်ရှုနိုင်သည်။ annealing zone ရှိ ကြီးမားသောအနားကွပ် ဆက်စပ်ပစ္စည်းများသည် မီးခိုးရောင်အခြေအနေတွင် ရှိသင့်သော်လည်း ပျော့ပြောင်းပြီး လျော့သွားခြင်းမရှိပါ။

ထို့နောက် မီးဖို၏ကိုယ်ထည်ကို တံဆိပ်ခတ်ခြင်း (အပြင်ဘက်ခွံကို စတီးပြားနှင့် အပိုင်းစတီးလ်များဖြင့် ဂဟေဆော်ထားပြီး၊ တွန်းလှည်းကို သံမဏိပြားနှင့် သံမဏိပြားဖြင့် ဂဟေဆော်ထားပြီး၊ တွန်းလှည်းသည် မီးဖိုအတွင်းပိုင်းနှင့် ပျော့ပျောင်းသောထိတွေ့မှုကို ဖြတ်သန်းကာ အပူဓာတ်ကိုလျှော့ချရန် သဲပိတ်ခြင်းယန္တရားကို ဖြတ်သန်းသည်။ နှင့် convection ဆုံးရှုံးမှု၊ မီးဖိုခန္ဓာကိုယ်၏တံဆိပ်ခတ်မှုကိုထိရောက်စွာသေချာစေရန်) တောက်ပသော annealing မီးဖိုကိုပိတ်ပြီးပြင်ပလေနှင့်ခွဲထုတ်သင့်သည်။ ဟိုက်ဒရိုဂျင်ကို အကာအရံဓာတ်ငွေ့အဖြစ် အသုံးပြု၍ အိတ်ဇောပေါက်တစ်ခုသာ ဖွင့်ထားပါသည် (ထွက်လာသော ဟိုက်ဒရိုဂျင်ကို မီးစွဲရန်အသုံးပြုသည်)။ စစ်ဆေးခြင်းနည်းလမ်းကို ဆပ်ပြာရေဖြင့် မွှေထားသော မီးဖို၏ အဆစ်များကြားတွင် ဓာတ်ငွေ့များ လည်ပတ်နေခြင်း ရှိမရှိကို စစ်ဆေးနိုင်ပါသည်။ ဓာတ်ငွေ့ လည်ပတ်ရန် အလွယ်ကူဆုံးနေရာမှာ ပိုက်ကို မွှေသည့် မီးဖိုထဲသို့ ရောက်သွားပြီး ပိုက်မှ ထွက်လာသည့် နေရာဖြစ်သည်။ ဤနေရာရှိ တံဆိပ်ခတ်ထားသော လက်စွပ်သည် ဝတ်ဆင်ရန် လွယ်ကူသည်။ ပြောင်းလဲရန် အမြဲတမ်းစစ်ဆေးပါ။

ဒုတိယအနေဖြင့်၊ အကာအကွယ်ဓာတ်ငွေ့ဖိအား၊ မိုက်ခရိုယိုစိမ့်မှုဖြစ်ပွားခြင်းမှကာကွယ်ရန်၊ မီးဖိုထဲတွင်အကာအကွယ်ဓာတ်ငွေ့သည် ဟိုက်ဒရိုဂျင်အကာအကွယ်ဓာတ်ငွေ့ဖြစ်ပါက၊ ယေဘုယျအားဖြင့် 20kBar ထက်ပို၍လိုအပ်သောအပြုသဘောဆောင်သောဖိအားကိုထိန်းသိမ်းထားသင့်သည်။ Annealing လေထု- ယေဘုယျအားဖြင့် သန့်စင်သော ဟိုက်ဒရိုဂျင်ကို ဖြာထွက်သည့်လေထုအဖြစ် အသုံးပြုကြပြီး လေထု၏ သန့်စင်မှုသည် 99.99% သို့မဟုတ် ထို့ထက်ပို၍ကောင်းသည်။ လေထု၏အခြားအစိတ်အပိုင်းသည် ပျော့ပျောင်းသောဓာတ်ငွေ့ဖြစ်ပါက၊ သန့်စင်မှုသည် လျော့နည်းနိုင်သော်လည်း အောက်ဆီဂျင် သို့မဟုတ် ရေခိုးရေငွေ့များစွာ မပါဝင်ရပါ။