Premye a tout, anvan ou chwazi ti jan an fè egzèsis, pran yon gade nan difikilte yo nan Nerjaveèibride asyepwosesis. Chèche konnen difikilte pou yo ka trè egzat, trè vit jwenn itilizasyon egzèsis la. Ki difikilte ki genyen nan pwosesis bride asye pur? Kouto kolan: Nerjaveèi asye pwosesis chip severite, tanperati koupe se trè wo. Lè chip la fò koule nan sifas la kouto devan, li pral rive adezif, soude fizyon ak lòt fenomèn adezif, ki afekte klète aparans nan pati yo trete; Travay di se grav.

Nan konsomasyon nangwo brides, gen anpil eleman fonksyonèl ki afektegwo brides. Isit la nou pale sou plizyè eleman komen. Premye a se tanperati a annealing (tanperati a annealing se paramèt tanperati a nan Jadendanfan an ak modèl respektivman, lè 50% nan Jadendanfan an ak sekans konplemantè yo se tanperati a nan molekil ADN doub-bloke.

Li se yon faktè enpòtan ki afekte espesifik PCR. Nan ka aspirasyon, tanperati a annealing ba ase pou asire ke Jadendanfan an defi ak sekans sib la, ak ase wo pou diminye separasyon ki pa espesifik. Tanperati rkwit rezonab varye ant 55 ℃ ak 70 ℃. Tanperati a annealing jeneralman mete nan 5 ℃ pi ba pase Tm nan Jadendanfan an.