Premye a tout, anvan ou chwazi ti jan egzèsis la, pran yon gade nan difikilte yo nan purbride asyepwosesis. Chèche konnen difikilte a ka trè egzat, trè vit pou jwenn itilizasyon egzèsis la. Ki difikilte nan pwosesis bride asye pur? Kouto kolan: Nerjaveèi asye pwosesis severite chip, koupe tanperati a trè wo. Lè chip la fò ap koule nan sifas la kouto devan, li pral rive adezif, soude fizyon ak lòt fenomèn adezif, ki afekte klète nan aparans nan pati yo trete; Travay redi se grav.

Nan konsomasyon an nanGwo èl, gen anpil eleman fonksyonèl ki afekteGwo èl. Isit la nou pale sou plizyè eleman komen. Premye a se tanperati a rkwir (tanperati rkwir se paramèt la tanperati nan Jadendanfan an ak modèl respektivman, lè 50% nan sekans lan Jadendanfan ak konplemantè yo se tanperati a nan doub-bloke molekil ADN.

Li se yon faktè enpòtan ki afekte espesifik nan PCR. Nan ka aspirasyon, tanperati rkwir la ba ase pou asire ke se Jadendanfan an defire ak sekans lan sib, ak wo ase diminye separasyon nonspecific. Tanperati rkwir rezonab varye ant 55 ℃ ak 70 ℃. Se tanperati a rkwir jeneralman mete nan 5 ℃ pi ba pase TM nan Jadendanfan an.